Иммуногистохимия
ФБУН ХНИИЭМ Роспотребнадзора планирует внедрить новый метод «иммуногистохимия» для его применения в диагностических и научных целях.
Иммуногистохимия - многоэтапный метод, позволяющий определить местоположение антигенов (протеинов) в клетках тканей, имеющих антигенные свойства. Данный метод основан на реакции антиген-антитело. Термин «иммуногистохимия» включает в себя два корня - «иммуно», что имеет отношение к антителам, используемым в данном методе, и «гисто», обозначающий ткань. Иммуногистохимия широко используется для определения патологических клеток и клеточных сигналов, понимания распределения и локализации антигенов в различных тканях, диагностики различных заболеваний (включая онкологические и инфекционные), разработки новых лекарственных средств и медико-биологических исследований.
Основателем иммуногистохимии является Albert H. Coons и его коллеги, которые впервые в 1941 году произвели метку антител флюоресцентым красителем, для определения антигена (пневмококка) в инфицированных тканях. Позже, в 1966 Nakane и Pierce, разработали пероксидазный метод иммуногистохимической окраски, при котором антитела конъюгируются (метятся) ферментом пероксидаза. Впервые применение иммуногистохимии на тканях, залитых в парафин, было осуществлено в 1974 году Taylor и коллегами.
В зависимости от способа определения антигена, различают прямой и непрямой метод иммуногистохимии.
Прямой метод - подразумевает прямую реакцию меченых антител с антигенами ткани. Данная техника является быстрой, простой и осуществляется в один этап, но обладает низкой чувствительностью из-за небольшой амплификации сигнала, поэтому наиболее широкое применение получил непрямой метод.
Непрямой метод подразумевает связывание первичных немеченых антител с желаемым антигеном, с последующим реагированием вторичных меченых антител с первичными антителами. Непрямой метод более чувствительный, чем прямой метод, из-за достижения амплификации сигнала. Модификациями непрямого метода являются метод PAP, ABC и SLAB.
Визуализация взаимодействия антигена с антителом может быть осуществлена множественными путями. В большинстве случаев антитела связаны с ферментом пероксидаза, данный фермент может катализировать реакцию с формированием цвета. Антитела также могут быть связаны с флуоресцентной меткой (флюорохромом), что даёт свечение при визуализации.
В зависимости от способности реагировать с одним или множеством эпитопов антигена, антитела разделяются на моноклональные и поликлональные. Кроме того, антитела классифицируются на первичные и вторичные. Первичные антитела синтезируются против желаемого антигена и в основном не связаны (не конъюгированы) с флюорохромами или ферментными метками, в то время как вторичные антитела синтезируются против иммуноглобулинов первичных антител и в большинстве случаев конъюгированы.
При существовании различных методик иммуногистохимии, вся процедура может быть разделена на 2 этапа: подготовка образцов и окрашивание. Подготовка включает в себя взятие материала, фиксацию, заключение тканей, приготовление слайдов, восстановление эпитопа, блокирование эндогенной пероксидазы, блокирование связывания с неспецифическими эпитопами. Окрашивание включает иммунодетекцию, контрастирующую окраску и заключение слайдов. Дальнейшая визуализация осуществляется с помощью обычного светового микроскопа или флюоресцентного микроскопа в зависимости от используемых антител.
 |
 |